当前位置: 洗涤设备 >> 洗涤设备优势 >> 微量定容测压法测定种子的呼吸速率
一、原理
微量检压计不仅用来研究有机体或部分组织的呼吸作用和发酵作用,而且也可以研究有关O2与CO2及其他气体交换的反应。如光合作用、酶的活性等。近年来又利用此法测定线粒体的呼吸强度,以鉴定杂种优势,为育种工作中对杂种的遗传性状研究法开辟了一条新途径,因此广泛用于植物生理、生化研究。
测压法的原理是在固定体积并保持恒温的密闭系统中,气体产生或消失的总量,可以利用气体定律计算求得。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料
待测的小麦、水稻萌发种子。
(二)仪器设备
瓦布格呼吸计(微量呼吸检压计),移液管,量筒,小镊子,称量瓶,橡皮筋数根;吸水纸。
(三)试剂
(1)20%KOH。
(2)凡士林。
(3)Brodie氏溶液;NaCl23g,牛胆酸钠5g,溶于mL水中,另加少许染料(酸性品红)使溶液染色,并加数滴浓麝香草酚酒精溶液作为防腐剂。
三、实验步骤
(一)种子吸氧量的测定
(1)取不同处理种子若干(体积约0.5mL左右),称其鲜重,然后用排水法测定其体积,先用滤纸将种子外面水分吸干,另取10mL量筒一个,内盛4~5mL的水,将种子放入量筒内观察水分上升体积,二次水分体积之差即为种子体积,将种子取出,用滤纸吸干附在种子外表的水分,然后将种子放入反应瓶的底部,再加0.5mL水。
(2)在中央小槽内加入20%KOH0.2mL,为了增大吸收CO2的能力,可用1cm×2cm滤纸折叠后插入中央小槽内,并在中央小槽口上涂上少量凡士林,防止碱液逸出。
(3)侧管的玻璃棒涂以凡士林后塞紧。压力计口亦涂上凡士林和反应瓶连接,转动反应瓶,使封口凡士林呈透明为止,然后用橡皮筋将反应瓶固定在压力计上(图2-20-1)。
(4)将压力计固定在水槽上,并打开活塞,平衡10~15min,在此过程中要检查反应瓶是否漏气。
(二)空白试验(作温压计用)
因压力计左管口是与大气相通,实验时室内气压或水槽温度微小变化对读数均有影响,为此,必须进行校正。
校正方法:即反应瓶中除不加种子外,其他处理与测压计完全相同。测压计与温压计两者的关系如表2-20-1:
(三)测定
当反应瓶内温度与水槽温度平衡后,将压力计上的活塞关闭。开始振荡,并记录开始时间,每隔15min记录测压计及混压计左管液面高度,读数时关闭振荡器,并将压力计的右管液面调整k50wm.c,再记录左管液面高度,共计4次
实验结束后,将反应瓶中的种子用小镊子取出,放置称量瓶内,在℃烘箱中烘至恒重,称其重量。
另将反应瓶上的凡士林用软纸揩拭干净、再用自来水冲洗后,置于洗涤液中浸泡0.5h,取出用水冲洗干净,再用蒸馏水冲洗1~2次,烘干,供下次使用。
四、结果计算
(一)求k值
(二)根据实际压力差值(h)